TRABAJOS
ORIGINALES
Frecuencia de
heteroplasmia en las regiones hipervariables HVI y HVII del ADN Mitocondrial en
una muestra de la población de Maracaibo, Venezuela
Frequency of heteroplasmy in HVI and HVII mitocondrial genome regions in
a population sample of Maracaibo, Venezuela
José Miguel Quintero Ferrer
1,2,3, Tatiana Carolina Pardo Govea 1, Lisbeth Beatriz Borjas Fuentes 1
https://doi.org
/10.5377/rcfh.v5i2.8885
1 Instituto de Investigaciones
Genéticas Dr. Heber Villalobos Cabrera, Facultad de Medicina, Universidad del
Zulia, Maracaibo, Venezuela.
2 Departamento de Salud Pública y
Social. Escuela de Bioanálisis, Facultad de Medicina, Universidad del Zulia,
Maracaibo, Venezuela.
3 Delegado por Venezuela ante la
Sociedad Latinoamericana de Genética Forense SLAGF.
*Correspondencia
a José Miguel Quintero Ferrer: jmquintero@fmed.luz.edu.ve
CITAR COMO
Quintero JM, Pardo T, Borjas L. Frecuencia de heteroplasmia
en las regiones hipervariables HVI y HVII del ADN Mitocondrial en una muestra
de la población de Maracaibo. Rev. cienc. forenses Honduras. 2019; 5(2):14-24.
ASPECTOS
ÉTICOS
Los autores declaran que no existe conflicto de interés en
la publicación de este artículo.
Todos los participantes firmaron consentimiento informado
autorizando la participación en el estudio.
RECIBIDO 5 Julio 2019 ACEPTADO: 19 Julio 2019
RESUMEN
Justificación: El estudio de los
polimorfismos de las regiones hipervariables I y II (HVI y HVII) del ADN
mitocondrial (ADNmt) se ha convertido en una herramienta invaluable para la
ciencia forense, ya que en algunas ocasiones un determinado individuo puede presentar
más de un tipo de ADN mitocondrial este fenómeno es conocido como Heteroplasmia.
Esta coexistencia de dos o más poblaciones de ADNmt puede ocurrir en una sola
mitocondria, célula o individuo, lo que puede aumentar la complejidad en la
interpretación de los resultados de las experticias forenses. Objetivos: Analizar la frecuencia de la
heteroplasmia en las regiones HVI y HVII del genoma mitocondrial en una muestra
de la población de Maracaibo. Metodología:
Se seleccionaron al azar 50 muestras de ADN de la población de Maracaibo, las
regiones hipervariables se amplificaron mediante reacción en cadena de la
polimerasa, posteriormente se secuenciaron mediante método de Sanger y los
fragmentos se separaron por electroforesis capilar, se reportaron las diferencias
con respecto a la secuencia de referencia de Cambridge. Resultados: El 26% de las muestras presentaron heteroplasmia en la
región HVI, el 52% en la región HVII. Conclusiones:
El hecho de aparecer la heteroplasmia en
una determinada secuencia no inválida el uso del análisis del ADN mitocondrial
con fines forenses, dependiendo de la complejidad del caso a peritar la
heteroplasmia puede ser de gran ayuda.
PALABRAS
CLAVE
Regiones
hipervariables, heteroplasmia, ADN mitocondrial.
ABSTRACT
Background: The study of the polymorphisms of
the hypervariable regions I and II (HVI and HVII) of the mitochondrial DNA
(DNAmt) has become an invaluable tool for forensic science, in some occasions a
certain individual can present more than one type of mtDNA, this phenomenon is
known as Heteroplasmy, this coexistence of two or more populations of DNAmt can
occur in a single mitochondrion, cell or individual, which can increase the
complexity in interpreting the results of forensic expertise. Objectives: Analyze the frequency of
heteroplasmy in the HVI and HVII regions of the mitochondrial genome of 50
randomly selected DNA samples from the Maracaibo population. Methodology: The hypervariable regions
were amplified by PCR, then sequenced using the Sanger method and the fragments
were separated by capillary electrophoresis, differences were reported with
respect to the Cambridge reference sequence. Results: 26% of the samples presented heteroplasmy in the HVI
region, while in the HVII region it was 52%. Conclusions: The appearance of heteroplasmy in a certain sequence
does not invalidate the use of mitochondrial DNA analysis for forensic
purposes, depending on the complexity of the case to assess heteroplasmy can be
of great help.
KEYWORDS
Hypervariable regions, heteroplasmy, mitochondrial DNA.
INTRODUCCIÓN
El genoma mitocondrial está conformado por una doble cadena de ácido
desoxirribonucleico (ADN) circular de 16569 pares de bases (pb) y organizado en
dos regiones clasificadas según su función en una región codificante que
contiene 37 genes implicados principalmente en la fosforilación oxidativa y una
región no codificante exenta de genes denominada región control o asa de
desdoblamiento1,2.
La región control (RC)
consta de 1121 pares de bases de longitud, abarca desde la posición 16024 hasta
la 16569 continuando desde la posición 1 hasta la 5763. Es
precisamente esta región la que es ampliamente analizada por los laboratorios
de genética forense y antropología molecular a nivel mundial debido a que no está
involucrada en la codificación de un producto génico4,5, permitiendo
que se generen mutaciones en ella, acumulándose con una frecuencia de 5 a 10
veces mayor que el resto del ADNmt6, en esta región se encuentra la
mayor variabilidad interpersonal ya que la probabilidad de que dos individuos
no relacionados de una población posean la misma secuencia en la RC es menor al
1 % (dependiendo de la población)7.
Estas mutaciones se
concentran en tres regiones específicas que según su grado de variabilidad son:
la región hipervariable 1 (HVI) que abarca las posiciones 16024 a la 16365, la
región hipervariable 2 (HVII) que va desde la posición 73 a la 340 y la región hipervariable 3 (HVIII) que va de
la posición 440 a la 560, además existen otras regiones con un menor grado de
variabilidad conocidas como región variable 1 (VRI) localizadas desde la
posición 16366 hasta la 72 y región variable 2 (VRII) que está comprendida
entre las posiciones 341 y 576.
El tipo de mutación más común en estas regiones es la puntual,
con una frecuencia de 40 veces de tipo transición (sustitución de una base
púrica por otra púrica o pirimidínica por pirimidínica) a una de tipo
transversión (cambio de una base nucleotídica púrica por pirimidínica o
viceversa) y pequeñas inserciones y deleciones en regiones homopolimericas
(poliC) presentes en ambas regiones hipervariables, entre las posiciones 303 y
315 y entre 16183 y 161948,9.
Ahora bien, el ADNmt no solo posee un elevado grado
polimórfico en la región control, ostenta además una serie de características
propias que hacen de él una estupenda herramienta en casos forenses complejos,
donde a través del análisis del ADN nuclear no sería posible obtener algún
resultado concluyente. Entre las características más importantes están: Herencia
materna, alto número de copias, alta tasa de mutación y la heteroplasmia.
En algunas ocasiones, un determinado individuo, por efecto
de las mutaciones, puede presentar más de un tipo de ADNmt, este fenómeno es
conocido como heteroplasmia (para diferenciarlo del estado normal de
homoplasmia), esta coexistencia de dos o más poblaciones de ADNmt puede ocurrir
en una sola mitocondria, célula o individuo9,10.
Durante el desarrollo las moléculas de ADNmt se replican
independientemente unas de otras y este proceso no está estrictamente ligado a
los procesos de división celular meiótica y mitótica. Por otra parte, el
proceso de replicación del ADNmt está asociado a un mayor nivel de error que el
que se encuentra en el ADN nuclear, se piensa que los mecanismos de reparación
actúan deficientemente en las mitocondrias La teoría de cuello de botella
explicaría en cierta manera el porqué de la aparición de diferentes
proporciones de heteroplasmias en distintos tejidos de un mismo individuo, así
como la aparición de estas diferencias entre individuos relacionados por vía
materna11. Cuando aparece heteroplasmia, lo habitual es que los
tipos de ADNmt que aparecen en un individuo difieran en una sola base, siendo
infrecuente la heteroplasmia en dos o más sitios. Se ha comprobado que tejidos
como los pelos son más susceptibles a que aparezca el fenómeno de la
heteroplasmia12 y que es más frecuente en la población de lo que se
pensaba13. La aparición de heteroplasmias ha sido recogida en
diversos casos de interés forense, siendo quizás el más conocido el caso de
identificación de los restos óseos del Zar Nicolás II14.
La heteroplasmia se puede dividir en heteroplasmia de
secuencia que ocurre cuando en una posición determinada de la secuencia del
ADNmt hay más de una base, por ejemplo la existencia de C/T en una determinada
posición del ADNmt y heteroplasmia de longitud que se manifiesta como la
variación en el número de bases existentes en un fragmento homopolímerico, por
ejemplo es característica la variación en el número de citosinas en las
regiones localizadas entre las bases 16183 y 16194 en HVI y entre las bases 303
y 315 en HVII, es común observar este tipo de heteroplasmia como un corrimiento
del marco de lectura en el electroferograma. Así, en un mismo individuo, pueden
coexistir poblaciones de ADNmt las cuales difieren en el número de citosinas
dentro de esos fragmentos9.
Cuando una célula heteroplásmica se divide, la transmisión
de las mitocondrias a las células hijas se realiza al azar, resultando que la
proporción de ADNmt mutante y normal, tras varios ciclos de división, puede
derivar hacia el mutante o el normal en un proceso conocido como segregación replicativa.
Esto hace que los niveles de heteroplasmia no siempre sean los mismos en los diferentes
tejidos de un individuo15.
El hecho de aparecer la heteroplasmia en una determinada
secuencia no inválida el uso del análisis del ADN mitocondrial con fines
forenses, sin embargo, se debe verificar que efectivamente se trata de una
heteroplasmia. Para ello se debe confirmar la aparición de dicho evento tanto
en la cadena 5`-3` como en la correspondiente cadena complementaria 3`-5` de la
secuencia analizada. En este caso la lectura de los picos en el
electroferograma debe ser clara y por encima del nivel basal o de ruido,
concretamente un 20% por encima de ese nivel basal, sin dejar lugar a dudas de
que efectivamente se trata de una heteroplasmia. Si no existe dicha certeza
conviene confirmarlo con adicionales análisis. Cuando aparece una heteroplasmia
puede ocurrir que las poblaciones de mitocondrias que coexisten lo hagan en
relación 80:20%, en cuyo caso los picos correspondientes a las bases que
generan la heteroplasmia, definirán una posición donde pudiera ser difícil
determinar con exactitud de que base se trata. En otras ocasiones dichas
poblaciones coexisten en porcentajes variados, esta diferencia se suele
reflejar también en el electroferograma, dependiendo de la complejidad del caso
a peritar la heteroplasmia puede ser de gran ayuda14.
MÉTODOLOGÍA
Población y muestra: La muestra comprendió
50 individuos, sin relación de parentesco, residentes en la ciudad de Maracaibo,
estado Zulia, Venezuela; seleccionados independientemente de la edad y sexo de
los individuos. Todas las personas autorizaron el uso de su perfil genético
para estudios genético-poblacionales, una vez informado del compromiso
institucional de mantener los datos anónimos.
Extracción de ADN, amplificación mediante PCR y caracterización por electroforesis capilar: El ADN
de cada muestra sanguínea se extrajo previamente mediante la técnica Salting
Out modificada16, se amplificaron a través de la PCR (del inglés,
Polymerase Chain Reaction) y por separado las regiones HVI (nucleótidos 16024 a
16365) y HVII (nucleótidos 72 a 340) del ADNmt. La mezcla de la PCR estuvo
constituida por: 10 μl de buffer Taq polimerasa 10X; 1,5 μl MgCl2 (1,5 mM); 1
μl dNTPs (0,2 mM); 0,4 μl Taq polimerasa (0,5 unidades); 28,1 μl de Agua; 2 μl
(15 pmol) de cada iniciador17, en conjunto con 1 ng de ADN genómico
en un volumen final de 50 μl. Las condiciones de amplificación de la PCR
fueron: 95°C 11 min; [94°C 45 s; 50°C (iniciadores HVI) 55ºC (iniciadores HVII)
1 min; 72°C 5 min 30 s; 30 veces]; 72°C 45 s; 4°C.
Los productos amplificados fueron purificados mediante el
estuche comercial Wizard® PCR Preps DNA Purification System (Promega®
Corporation, Madison, WI, USA), luego fueron secuenciados mediante BigDye v3.1
Ready Reaction (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA), las muestras
secuenciadas fueron purificadas utilizando Wizard® MagneSil® Sequencing
Reaction Clean-Up System (Promega® Corporation, Madison, WI, USA). Las muestras
ya purificadas fueron caracterizadas en el equipo semiautomatizado ABI PRISM®
310 Genetic Analyzer (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA), el cual se
acondicionó previamente utilizando POP-6 (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA,
USA) y capilar de secuenciación de 61 cm de longitud por 50 μm de diámetro,
bajo los siguientes parámetros de corrida: Tiempo de inyección: 50 s,
temperatura 50ºC y tiempo de corrida para HVI de 90 min y HVII 70 min. Los
datos crudos de la secuenciación se analizaron con el programa Sequencing
Analysis (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA), luego, se procedió a la
correspondiente edición con el programa Sequence Scanner v1.0 (ThermoFisher
Scientific, Waltham, MA, USA). Finalmente se procedió a la comparación de los
fragmentos secuenciados con la secuencia nucleotídica de referencia rCRS
(GenBank NC_012920.1), utilizando el software Staden Package v2.0.0b918,
los haplogrupos fueron asignados mediante el software on-line mtDNA manager19.
La clasificación de la
heteroplasmia se realizó mediante el método de Lutz-Bonengel y colaboradores20
aplicando las siguientes fórmulas:
rseq = rQV (16189-16207.x) / rQV (16170-16188.x)*
rseq = rQV (310-328.x) / rQV (291-309.x)
Siendo rseq la relación de los valores de calidad y rQV los
valores de calidad de cada nucleótido.
*Fórmula adaptada a la región HVI usada para esta investigación,
no aportada por Lutz-Bonengel.
Los resultados de las
fórmulas permiten clasificar las secuencias en cuatro grupos: Grupo I (si la relación es >1,
homoplasmia), Grupo II (0,85 - 0,99), Grupo III (<0,85), y
Grupo IV (patrón desordenado de picos), como se muestran en la Figura 1.
La presente
investigación se realizó siguiendo los lineamientos de la Sociedad
Internacional de Genética Forense para la caracterización del ADNmt 21.
RESULTADOS
En 50 muestras de ADN
analizadas, considerando los segmentos poliC (entre las posiciones 16183 y
16194 en la región HVI y entre 303 y 315 en HVII), para la región HVI, se
detectaron 65 sitios variables y 37 haplotipos diferentes, de las cuales 32
fueron únicos (frecuencia haplotípica 0,02 para cada uno) y el resto se
encuentra en al menos dos muestras. Mientras que para la región HVII, 43
posiciones nucleotídicas variables fueron detectadas y 28 haplotipos diferentes
fueron observados, de los cuales 22 fueron únicos (frecuencia haplotípica de
0,02 en cada uno), como se muestra en el Cuadro
I. En combinación ambas regiones hipervariables presentaron 108
polimorfismos y 43 haplotipos distintos, de los cuales 38 fueron únicos 4.
En las muestras solo
se observó heteroplasmia de longitud, esta se clasifico mediante secuenciación
directa en cuatro grupos I, II, III y VI según el grado en la cual se presentó
(Figura 1). El 26% de las muestras
presentaron heteroplasmia en la región HVI, mientras que en la región HVII fue
mayor con 52% del total se secuencias analizadas. 31 muestras del total
presentaron heteroplasmia en al menos una región hipervariable, por lo que la
heteroplasmia estuvo presente en el 62% de las muestras, (Cuadro II).
Figura 1. Clasificación
mediante secuenciación directa de las heteroplasmias de longitud.
Grupo I (homoplasmia)
Grupo II (0,85 - 0,99)
Grupo III (<0,85)
Grupo IV (patrón desordenado de picos)
DISCUSIÓN
Una transición en
particular la 16189T>C origina un fragmento poliC de 10 citosinas entre los
nucleótidos 16183 y 16194, al ocurrir esto generalmente la ADN polimerasa
mitocondrial gamma comete errores de tipo “slippage”, habitualmente
insertando un número variable de citosinas en esta región, esto ocasiona una
superposición de estos fragmentos, originando que en los electroferogramas en
este segmento se observe como un “ruido de fondo”22, dificultando la
lectura e interpretación de las secuencias en esa región, el 26% de las
muestras analizadas mostraron este cambio de T por C en la región HVI, este
porcentaje varía en las diferentes poblaciones encontrando 5% en Suiza23,
15% Austria24 y 37% en Japón25.
Un estudio realizado
por Irwin y colaboradores donde se secuenció la región control de 5,015
individuos de diversas poblaciones, arrojó que el 52% de esas muestras
presentaban heteroplasmia
de longitud, y esto
era observado claramente cuando se producía un segmento poliC generalmente de
≥9 citosinas, que se originaba al ocurrir las transiciones en las posiciones
16184 y 16198 en la región HVI, causando una mezcla en el 97% de los casos de
10 y 11 citosinas, la región HVII en cambio, mostró que el número de citosinas
necesario para provocar el “slippage” era menor que en HVI de ≥7
citosinas y el 76% de los casos mostró una mezcla de 8 y 9 citosinas26.
Ese mismo comportamiento ocurrió en las muestras de Maracaibo, las muestras que
presentaron los cambios nucleotídicos 16183A y 16189C (ejemplo la muestra
MBO0284) produjeron un fragmento de aproximadamente 12 citosinas, presentaron
heteroplasmia grado IV, mientras que la región HVII no hubo cambios
favorecieran la formación de ≥7 citosinas por lo que ninguna de las secuencias
presentó una heteroplasmia grado IV.
Por otro lado, 12 de las 16 muestras mencionadas
anteriormente pertenecen al grupo IV, el cual se asocia a segmentos poliC de
11, 12, 13 y 14 citosinas en una misma muestra, todas mostraron la transversión
16183A>C, la transición 16189T>C y la inserción 16193.1C, este grupo se
caracteriza técnicamente por una caída de la lectura electroforética después
del fragmento poliC, haciendo prácticamente ilegible la secuencia después de
ese fragmento por lo que la única manera de leerla es a través del fragmento complementario
forward o reverse según el caso.
Un segmento parecido
al de la región HVI está presente en la HVII entre los nucleótidos 303 y 315, pero
a diferencia la región HVI, en la región HVII generalmente no sucede el cambio
T por C en este caso en el nucleótido 310, y efectivamente ninguna de las
muestras del presente trabajo presenta ese cambio, sin embargo, la
heteroplasmia estuvo presente en un porcentaje mayor que en HVI en un 52% de las
muestras, exceptuando las que clasificaron dentro del grupo I, la proporción
de muestras fue igual para los grupos II y III,14 muestras en cada
grupo y ninguna muestra se clasificó dentro del grupo IV. El grupo II se asocia
a segmentos poliC de 7 y 8 citosinas mientras que el grupo III a 9 y 10 citosinas
20.
Cuadro I
Haplotipos mitocondriales de las regiones hipervariables I y
II de individuos de la ciudad de Maracaibo, Venezuela.
Muestra |
Haplogrupo |
HVII (72 - 340) |
HVI (16024 - 16365) |
MBO01 |
A |
73G, 146C, 152C, 153G, 214G, 235G, 263G, 309.1C,
309.2C, 315.1C |
16111T, 16223T, 16290T, 16319A |
MBO02 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16111T, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO03 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16213A, 16223T, 16245T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO04 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16223T, 16266T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO05 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16129A, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO06 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO07 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.2C |
16111T, 16129A, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO08 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16111T, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO09 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16092C, 16111T, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO10 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16129A, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO11 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO12 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16213A, 6223T,16290T, 16319A, 16362C |
MBO13 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16213A, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO14 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 235G, 263G, 315.1C |
16111T, 16223T, 16290T, 16319A, 16359C, 16362C |
MBO15 |
A2 |
146C, 235G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16192T, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO16 |
A2 |
73G, 146C, 153G, 215G, 235G, 263G, 315.1C |
16111T, 16223T, 16290T, 16319A, 16362C |
MBO17 |
B4 |
73G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16183C, 16189C, 16193.1C, 16217C |
MBO18 |
B4 |
73G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16217C, 16182C, 16183C, 16189C, 16193.1C |
MBO19 |
B4 |
73G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16217C, 16183C, 16182C, 16189C, 16193.1C |
MBO20 |
B4 |
73G, 131C, 183G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16166G, 16183C, 16189C, 16193.1C, 16217C |
MBO21 |
B4 |
73G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16183C, 16189C, 16193.1C, 16217C |
MBO22 |
B4 |
73G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16183C, 16189C, 16193.1C, 16217C |
MBO23 |
B4 |
73G, 131C, 183G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16166G, 16167T, 16183C, 16189C, 16193.1C, 16217C, 16361A |
MBO24 |
B4 |
73G, 263G, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16217C, 16193.1C, 16193.2C, 16189C, 16183C |
MBO25 |
B4 |
73G, 195C, 263G, 315.1C |
16148T, 16183C, 16189C, 16193.1C, 16217C |
MBO26 |
C1 |
73G, 115C, 116d, 152C, 249d, 263G, 290d,
291d, 309.1C, 309.2C, 315.1C |
16179T, 16223T, 16298C, 16325C, 16327T |
MBO27 |
C1 |
73G, 115d, 119C, 249d, 263G, 290d, 291d, 309.1C, 315.1C |
16075C, 16223T, 16298C, 16325C, 16327T |
MBO28 |
D1 |
73G, 152C, 155C, 263G, 315.1C |
16183C, 16189C, 16193.1C, 16223T, 16311C, 16325C, 16362C |
MBO29 |
D1 |
73G, 195C, 263G, 315.1C |
16223T, 16325C, 16362C |
MBO30 |
D1 |
73G, 152C, 263G, 315.1C |
16092C, 16142T, 16223T, 16274A, 16311C, 16325C, 16362C |
MBO31 |
D1 |
73G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16176T, 16223T, 16261T, 16325C, 16362C |
MBO32 |
D4c D4h3 |
73G, 152C, 263G, 309.1C, 315.1C |
16187T, 16203G, 16223T, 16241G, 16245T, 16301T, 16319A, 16342C, 16362C |
MBO33 |
D4c D4h3 |
73G, 152C, 263G, 309.1C, 315.1C |
16187T, 16203G, 16223T, 16241G, 16245T, 16301T, 16319A, 16342C, 16362C |
MBO34 |
D4c D4h3 |
73G, 152C, 263G, 309.1C, 315.1C |
16187T, 16203G, 16223T, 16241G, 16245T, 16301T, 16319A, 16342C, 16362C |
MBO35 |
H5 |
263G, 315.1C |
16209C, 16304C |
MBO36 |
K1a |
73G, 263G, 309.1C, 315.1C |
16093C, 16167T, 16224C, 16311C |
MBO37 |
L0a1b |
93G, 95C, 185A, 189G, 236C, 247A, 263G, 309.1C, 315.1C |
16129A, 16148T, 16168T, 16172C,16187T, 16188G,
16189C, 16223T, 16230G,16278T, 16293G, 16311C, 16320T |
MBO38 |
L1b1 |
73G, 152C, 182T, 185T, 189G, 195C, 247A, 263G, 315.1C |
16126C, 16187T, 16189C, 16223T, 16264T, 16270T, 16278T, 16311C |
MBO39 |
L1c |
73G, 89C, 93G, 95C, 152C, 182T, 186A, 189C,
236C, 247A, 263G, 297G, 315.1C, 316A |
16129A, 16189C, 16223T, 16274A, 16278T, 16293G, 16294T, 16311C |
MBO40 |
L1c |
73G, 89C, 93G, 95C, 152C, 182T, 186A, 189C,
236C, 247A, 263G, 297G, 309.1C, 315.1C, 316A |
16129A, 16189C, 16274A, 16278T, 16293G, 16294T, 16311C, 16360T |
MBO41 |
L1c3b |
73G, 151T, 152C, 182T, 186A, 189C, 247A, 263G,
315.1C, 316A |
16086C, 16104T, 16129A, 16187T, 16188T,
16189C, 16223T, 16278T, 16293G, 16294T, 16301G, 16311C, 16360T |
MBO42 |
L3b |
73G, 263G, 315.1C |
16124C, 16186T, 16223T, 16278T, 16291T, 16362C |
MBO43 |
L3b1b |
73G, 151T, 152C, 263G, 315.1C |
16124C, 16223T, 16234T, 16278T, 16362C |
MBO44 |
L3b1b |
89C, 105.1C, 106C, 111C, 146C, 152C, 153G,
198T, 235G, 309.1C, 315.1C |
16111T, 16223T, 16234T, 16290T, 16319A, 16360T, 16362C |
MBO45 |
L3e3 |
73G, 150T, 195C, 263G, 315.1C |
16093C, 16148T, 16223T, 16265T |
MBO46 |
L4b1 |
73G, 150T, 199C, 204C, 249A, 263G, 315.1C, |
16179T, 16183C, 16189C, 16193.1C, 16223T, 16239T, 16311C, 16362C |
MBO47 |
N1b |
73G, 152C, 263G, 309.1C, 315.1C |
16145A, 16176G, 16223T, 16311C |
MBO48 |
U4a3 |
73G, 195C, 247A, 263G, 315.1C |
16265G, 16356C, 16362C |
MBO49 |
W3 |
73G, 189G, 194T, 195C, 199C, 204C, 207A, 263G, 315.1C |
16223T, 16292T, 16362C |
MBO50 |
C1 |
73G, 151T, 249d, 263G, 290d, 291d, 315.1C |
16051G, 16086C, 16129A, 16223T, 16325C, 16327T |
M: Muestra; Hg: Haplogrupo
Cuadro II. Clasificación de la heteroplasmia de longitud en las
regiones HVI y HVII.
Grupo |
HVI |
HVII |
I |
37 |
24 |
II |
1 |
13 |
III |
- |
13 |
IV |
12 |
- |
Los grupos II y III
son grupos que presentan menos complejidad que el grupo IV, debido a que no hay
un “ruido de fondo” tan marcado como el grupo IV, no obstante, se corroboro la
presencia de la heteroplasmia en dos secuenciaciones independientes al igual que
en la región HVI tal como lo establece la Sociedad Internacional de Genética
Forense9,24.
Ahora bien, es importante destacar que la presencia de
heteroplasmia puede ser de gran ayuda como en el caso del Zar Nicolás II, donde
Georgij Romanov el hermano del Zar
presentaba heteroplasmia de posición en el nucleótido 16169 al igual que el Zar
Nicolás II; sin embargo, dada la complejidad de la interpretación de la heteroplasmia,
han surgido recomendaciones para la asignación coherente de las secuencias con
heteroplasmia de longitud, las cuales fueron seguidas en esta investigación27,
debido a esta complejidad algunos trabajos omiten esta región en sus
resultados.
CONCLUSIONES
Es importante determinar
la frecuencia de la heteroplasmia en las diversas poblaciones ya que puede
acrecentar la complejidad en la interpretación de los resultados en las
experticias forenses, por lo que deben tomarse estrategias (cambiar
iniciadores, uso de plásmidos, entre otros) que permitan obtener resultados
óptimos para ser valorados por el genetista forense, por eso motivo las
regiones poliC son generalmente obviadas en los reportes, a pesar de ello, es
indiscutible la utilidad del genoma mitocondrial en casos forenses donde a
través de otras estrategias moleculares no sería posible obtener resultados
concluyentes.
REFERENCIAS
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